Soláthraíonn teoiricí éagsúla cosanta plandaí treoir theoiriciúil thábhachtach chun patrúin meitibileachta speisialaithe plandaí a mhíniú, ach tá a bpríomh-réamh-mheastacháin le tástáil fós. Anseo, bhain muid úsáid as anailís neamhchlaonta mais-speictriméadrachta tandem (MS/MS) chun meitibileam na sraitheanna maolaithe tobac a iniúchadh go córasach ó phlandaí aonair go daonraí agus speicis ghaolmhara, agus phróiseáil muid líon mór teoiricí gnéithe mais-speictriméadracha bunaithe ar speictrim cumaisc san fhaisnéis. Creat chun príomh-réamh-mheastacháin na dteoiricí cosanta is fearr (OD) agus sprice gluaiste (MT) a thástáil. Tá an chomhpháirt faisnéise de mheitibileamaíocht plandaí comhsheasmhach le teoiric OD, ach tá sé contrártha le príomh-réamh-mheastachán theoiric MT ar dhinimic meitibileamaíochta de bharr luibhiteoirí. Ón scála micrea go dtí an scála macra-éabhlóideach, aithníodh an comhartha jasmonate mar phríomh-chinntitheoir OD, agus sholáthair an comhartha eitiléine mínchoigeartú ar an bhfreagairt shonrach luibhiteora a ndearnadh nótaí uirthi ag an líonra móilíneach MS/MS.
Is iad meitibilítí speisialta le struchtúir éagsúla na príomh-rannpháirtithe in oiriúnú plandaí don chomhshaol, go háirithe i gcosaint naimhde (1). Spreag an t-éagsúlú iontach atá ar an meitibileachta speisialta a fhaightear i bplandaí blianta fada de thaighde domhain ar a go leor gnéithe de fheidhmeanna éiceolaíocha, agus tá liosta fada teoiricí cosanta plandaí cruthaithe aige, arb iad forbairt éabhlóideach agus éiceolaíoch idirghníomhaíochtaí plandaí-feithidí iad. Soláthraíonn taighde eimpíreach treoir thábhachtach (2). Mar sin féin, níor lean na teoiricí cosanta plandaí seo cosán normatach na réasúnaíochta díochlaonta hipitéiseach, ina raibh réamh-mheastacháin thábhachtacha ag an leibhéal céanna anailíse (3) agus a ndearnadh tástáil orthu go turgnamhach chun an chéad timthriall eile den fhorbairt theoiriciúil a chur chun cinn (4). Cuireann teorainneacha teicniúla srian le bailiú sonraí do chatagóirí meitibileach sonracha agus eisiatar anailís chuimsitheach ar mheitibilítí speisialaithe, rud a chuireann cosc ​​​​ar chomparáidí idirchatagóirí atá riachtanach le haghaidh forbairt theoiriciúil (5). Cuireann easpa sonraí meitibileachta cuimsitheacha agus airgeadra coiteann chun sreabhadh oibre próiseála an spáis meitibileach idir grúpaí plandaí éagsúla a chur i gcomparáid bac ar aibíocht eolaíoch an réimse.
Is féidir leis na forbairtí is déanaí i réimse meitibileacht speictriméadrachta maise tandem (MS/MS) na hathruithe meitibileacha laistigh de speicis agus idir speicis de chlad córais ar leith a léiriú go cuimsitheach, agus is féidir iad a chomhcheangal le modhanna ríomhaireachtúla chun an chosúlacht struchtúrach idir na meascáin chasta seo a ríomh. Eolas roimh ré ar cheimic (5). Soláthraíonn an meascán de theicneolaíochtaí chun cinn san anailís agus sa ríomhaireacht creat riachtanach le haghaidh tástála fadtéarmach ar go leor tuartha a rinne teoiricí éiceolaíocha agus éabhlóideacha na héagsúlachta meitibileach. Thug Shannon (6) teoiric faisnéise isteach den chéad uair ina alt ceannródaíoch i 1948, ag leagan an bhunchloch don anailís mhatamaiticiúil ar fhaisnéis, a úsáideadh i go leor réimsí seachas a feidhmchlár bunaidh. Sa ghéanómaíocht, cuireadh teoiric na faisnéise i bhfeidhm go rathúil chun faisnéis choimeádach seicheamhach a chainníochtú (7). I dtaighde transcriptómaíochta, déanann teoiric na faisnéise anailís ar na hathruithe foriomlána sa transcriptóm (8). I dtaighde roimhe seo, chuireamar creat staitistiúil na teoirice faisnéise i bhfeidhm ar mheitibileacht chun cur síos a dhéanamh ar shaineolas meitibileach leibhéal na fíocháin i bplandaí (9). Anseo, comhcheanglaímid an sreabhadh oibre bunaithe ar MS/MS le creat staitistiúil na teoirice faisnéise, arb iad is sainairíonna an éagsúlacht meitibileach san airgeadra coiteann, chun príomh-réamh-mheastacháin theoiric chosanta plandaí an mheitibileim a spreagann luibhiteoirí a chur i gcomparáid.
De ghnáth bíonn creatlacha teoiriciúla cosanta plandaí cuimsitheach dá chéile agus is féidir iad a roinnt ina dhá chatagóir: iad siúd a dhéanann iarracht dáileadh meitibilítí plandaí-shonracha a mhíniú bunaithe ar fheidhmeanna cosanta, amhail cosaint optamach (OD) (10), sprioc ghluaiste (MT) (11) agus teoiric an chuma (12), agus cuid eile ag lorg mínithe meicniúla ar an gcaoi a mbíonn tionchar ag athruithe in infhaighteacht acmhainní ar fhás plandaí agus ar charnadh meitibilítí speisialaithe, amhail carbón: hipitéis chothromaíochta cothaitheach (13), hipitéis ráta fáis (14), agus hipitéis chothromaíochta fáis agus difreála (15). Tá an dá shraith teoiricí ag leibhéil éagsúla anailíse (4). Mar sin féin, tá dhá theoiric a bhaineann le feidhmeanna cosanta ag an leibhéal feidhmiúil i réim sa chomhrá faoi chosaintí bunreachtúla agus ionduchtaithe plandaí: teoiric OD, a ghlacann leis nach n-infheistíonn plandaí ina gcosaintí ceimiceacha costasacha ach amháin nuair is gá, mar shampla, nuair a ionghabhtar iad. Nuair a dhéanann ainmhí féir ionsaí, dá bhrí sin, de réir na féidearthachta go ndéanfar ionsaí amach anseo, sanntar an comhdhúil le feidhm chosanta (10); Molann an hipitéis MT nach bhfuil aon ais ann d’athrú meitibilítí treorach, ach go n-athraíonn an meitibilít go randamach, rud a chruthaíonn an fhéidearthacht go gcuirfidh sé bac ar “sprioc ghluaiseachta” meitibileach na luibhiteoirí ionsaitheacha. Is é sin le rá, déanann an dá theoiric seo tuartha codarsnacha faoin athmhúnlú meitibileach a tharlaíonn tar éis ionsaí luibhiteoirí: an gaol idir carnadh aontreoch meitibilítí le feidhm chosanta (OD) agus athruithe meitibileach neamhthreoracha (MT) (11).
Baineann na hipitéisí OD agus MT ní hamháin leis na hathruithe spreagtha sa mheitibileam, ach freisin leis na hiarmhairtí éiceolaíocha agus éabhlóideacha a bhaineann le carnadh na meitibilítí seo, amhail costais agus buntáistí oiriúnaitheacha na n-athruithe meitibileach seo i dtimpeallacht éiceolaíoch ar leith (16). Cé go n-aithníonn an dá hipitéis feidhm chosanta meitibilítí speisialaithe, a d'fhéadfadh a bheith costasach nó nach bhféadfadh, is é an príomh-thuar a dhéanann idirdhealú idir na hipitéisí OD agus MT ná treo na n-athruithe meitibileach spreagtha. Is é tuar na teoirice OD a fuair an aird is mó ó thaobh turgnamhach de go dtí seo. Áirítear leis na tástálacha seo staidéar ar fheidhmeanna cosanta díreacha nó indíreacha fíochán éagsúil comhdhúile sonracha i dtithe gloine agus i ndálaí nádúrtha, chomh maith le hathruithe i gcéim forbartha plandaí (17-19). Mar sin féin, go dtí seo, mar gheall ar easpa sreabha oibre agus creat staitistiúil le haghaidh anailíse cuimsitheach domhanda ar éagsúlacht meitibileach aon orgánaigh, tá an príomhdhifríocht tuar idir an dá theoiric (is é sin, treo na n-athruithe meitibileach) le tástáil fós. Anseo, soláthraímid anailís den sórt sin.
Ceann de na tréithe is suntasaí de mheitibilítí plandaí-shonracha ná a n-éagsúlacht struchtúrach mhór ag gach leibhéal ó phlandaí aonair, daonraí go speicis chomhchosúla (20). Is féidir go leor athruithe cainníochtúla i meitibilítí speisialaithe a fheiceáil ag scála an daonra, agus is gnách go gcoinnítear difríochtaí cáilíochtúla láidre ag leibhéal an speicis (20). Dá bhrí sin, is í an éagsúlacht meitibileach plandaí príomhghné na héagsúlachta feidhmiúla, rud a léiríonn an inoiriúnaitheacht do nideoga éagsúla, go háirithe na nideoga sin a bhfuil féidearthachtaí ionraidh éagsúla acu ag feithidí speisialta agus luibhiteoirí coitianta (21). Ó alt ceannródaíoch Fraenkel (22) ar na cúiseanna le meitibilítí plandaí-shonracha, meastar gur brúnna roghnúcháin tábhachtacha iad idirghníomhaíochtaí le feithidí éagsúla, agus creidtear gur mhúnlaigh na hidirghníomhaíochtaí seo plandaí le linn na héabhlóide. Cosán meitibileach (23). Féadfaidh difríochtaí idirspeiceas in éagsúlacht meitibilítí speisialaithe an chothromaíocht fhiseolaíoch a bhaineann le cosaint bhunreachtúil agus ionduchtaithe plandaí i gcoinne straitéisí luibhiteoirí a léiriú freisin, toisc go mbíonn an dá speiceas comhghaolmhar go diúltach lena chéile go minic (24). Cé gur féidir go mbeadh sé tairbheach cosaint mhaith a choinneáil i gcónaí, cuireann athruithe meitibileacha tráthúla a bhaineann le cosaint buntáistí soiléire ar fáil maidir le ligean do phlandaí acmhainní luachmhara a leithdháileadh ar infheistíochtaí fiseolaíocha eile (19, 24), agus an gá le siombóis a sheachaint. Damáiste comhthaobhach (25). Ina theannta sin, féadfaidh na hathruithe seo ar mheitibilítí speisialaithe de bharr luibhiteoirí feithidí dáileadh millteach a bheith mar thoradh orthu sa daonra (26), agus féadfaidh siad léamha díreacha ar athruithe nádúrtha suntasacha sa chomhartha aigéad jasmonach (JA) a léiriú, a d'fhéadfadh a bheith cothabháilte sa daonra. Is comhbhabhtálacha idir cosaint i gcoinne luibhiteoirí agus iomaíocht le speicis shonracha iad comharthaí JA arda agus ísle (27). Ina theannta sin, caillfear agus claochlófar go tapa conairí bithshintéiseacha meitibilít speisialaithe le linn na héabhlóide, rud a fhágann dáileadh meitibileach paisteach i measc speiceas gaolmhar go dlúth (28). Is féidir na polamorfachtaí seo a bhunú go tapa mar fhreagairt ar phatrúin luibhiteoirí atá ag athrú (29), rud a chiallaíonn gur príomhfhachtóir é luaineacht phobail luibhiteoirí a thiomáineann éagsúlacht meitibileach.
Anseo, réitigh muid na fadhbanna seo a leanas go sonrach. (I) Conas a athchumraíonn an fheithid luibhiteach meitibileach an phlanda? (ii) Cad iad na príomhchodanna faisnéise de phlaisteacht meitibileach is féidir a chainníochtú chun réamhinsintí na teoirice cosanta fadtéarmacha a thástáil? (iii) Ar cheart meitibileach an phlanda a athchlárú ar bhealach atá uathúil don ionsaitheoir, más ea, cén ról atá ag hormón plandaí i bhfreagairt meitibileach shonrach a oiriúnú, agus cé na meitibilítí a chuireann le sainiúlacht speicis na cosanta? (iv) Ós rud é gur féidir na réamhinsintí a dhéanann go leor teoiricí cosanta a leathnú thar gach leibhéal de na fíocháin bhitheolaíocha, d'fhiafraíomar cé chomh comhsheasmhach is atá an freagairt meitibileach a tharlaíonn ó chomparáid inmheánach go comparáid idir speicis? Chun na críche seo, rinneamar staidéar córasach ar mheitibileam duille nicitín tobac, ar planda samhail éiceolaíoch é a bhfuil meitibileacht shaibhir speisialaithe aige, agus atá éifeachtach i gcoinne larbhaí dhá luibhiteoir dúchasacha, Lepidoptera Datura (Ms) (An-ionsaitheach, a ithetar den chuid is mó). Ar Solanaceae agus Spodoptera littoralis (Sl), is cineál "géineas" iad péisteanna duille cadáis, le plandaí óstacha Solanaceae agus óstaigh eile de ghéineas agus de fhine eile Bia plandaí. Rinneamar parsáil ar speictream meitibileachta MS/MS agus bhain muid tuairiscí staitistiúla teoiric faisnéise amach chun teoiricí OD agus MT a chur i gcomparáid. Cruthaíomar léarscáileanna sainiúlachta chun céannacht na bpríomhmheitibilítí a nochtadh. Leathnaíodh an anailís chuig daonra dúchasach N. nasi agus speicis tobac dlúthghaolmhara chun an chomhathraitheacht idir comharthaíocht hormóin plandaí agus ionduchtú OD a anailísiú tuilleadh.
Chun léarscáil fhoriomlán a ghabháil faoi phlaisteacht agus struchtúr meitibilít duille tobac luibhiteach, bhain muid úsáid as sreabhadh oibre anailíse agus ríofa a forbraíodh roimhe seo chun speictrim MS/MS neamhspleácha sonraí ardtaifigh a bhailiú agus a dhíchonvolú go cuimsitheach ó shleachta plandaí (9). Is féidir leis an modh neamhdhifreáilte seo (ar a dtugtar MS/MS) speictrim cumaisc neamh-iomarcacha a thógáil, ar féidir iad a úsáid ansin do gach anailís ar leibhéal na comhdhúile a thuairiscítear anseo. Tá na meitibilítí plandaí díchonvolúite seo de chineálacha éagsúla, ina bhfuil na céadta go na mílte meitibilít (thart ar 500-1000-s/MS/MS anseo). Anseo, breithnímid plaisteacht meitibileach i gcreat na teoirice faisnéise, agus déanaimid cainníochtú ar éagsúlacht agus ar ghairmiúlacht an mheitibileoim bunaithe ar eintreapacht Shannon an dáilte minicíochta meitibileach. Ag baint úsáide as an bhfoirmle a cuireadh i bhfeidhm roimhe seo (8), ríomhamar sraith táscairí ar féidir iad a úsáid chun éagsúlacht meitibileachta (táscaire Hj), speisialtóireacht phróifíle meitibileach (táscaire δj) agus sainiúlacht meitibileach meitibilít aonair (táscaire Si) a chainníochtú. Ina theannta sin, chuireamar Innéacs Plaisteachta an Achair Choibhneasta (RDPI) i bhfeidhm chun ionduchtacht meitibileachta luibhiteoirí a chainníochtú (Fíor 1A) (30). Laistigh den chreat staitistiúil seo, déileálaimid le speictream MS/MS mar an t-aonad faisnéise bunúsach, agus próiseálaimid líonmhaireacht choibhneasta MS/MS i léarscáil dáilte minicíochta, agus ansin úsáidimid eintreapacht Shannon chun éagsúlacht meitibileachta a mheas uaidh. Déantar speisialtóireacht an mheitibileachta a thomhas de réir shainiúlacht mheánach speictrim MS/MS aonair. Dá bhrí sin, déantar an méadú ar líonmhaireacht roinnt ranganna MS/MS tar éis ionduchtú luibhiteoirí a chlaochlú ina ionduchtacht speictreach, RDPI agus speisialtóireacht, is é sin, an méadú ar an innéacs δj, toisc go dtáirgtear meitibilítí níos speisialaithe agus go dtáirgtear innéacs Si ard. Léiríonn ísliú innéacs éagsúlachta Hj go laghdaítear líon na MS/MS ginte, nó go n-athraíonn dáileadh minicíochta an phróifíle i dtreo níos lú aonfhoirmeach, agus a neamhchinnteacht fhoriomlán á laghdú ag an am céanna. Trí ríomh an innéacs Si, is féidir a aibhsiú cé na MS/MS a spreagann luibhiteoirí áirithe, agus os a choinne sin, cé na MS/MS nach bhfreagraíonn don ionduchtú, arb é an príomhtháscaire é chun idirdhealú a dhéanamh idir tuar MT agus OD.
(A) Tuairiscí staitistiúla a úsáidtear le haghaidh ionduchtacht sonraí MS/MS luibhiteach (H1 go Hx) (RDPI), éagsúlacht (innéacs Hj), speisialtóireacht (innéacs δj) agus sainiúlacht meitibilítí (innéacs Si). Léiríonn méadú ar an méid speisialtóireachta (δj) go dtáirgfear níos mó meitibilítí sonracha luibhiteacha, ar an meán, agus léiríonn laghdú ar éagsúlacht (Hj) laghdú ar tháirgeadh meitibilítí nó dáileadh míchothrom meitibilítí sa léarscáil dáilte. Déanann luach Si measúnú ar cibé an bhfuil an meitibilít sainiúil do riocht ar leith (anseo, luibhiteach) nó an gcoimeádtar é ag an leibhéal céanna. (B) Léaráid choincheapúil de réamhaisnéis teoiric chosanta ag baint úsáide as ais teoiric faisnéise. Réamhaisnéisíonn teoiric OD go méadóidh ionsaí luibhiteach meitibilítí cosanta, rud a mhéadaíonn δj. Ag an am céanna, laghdaíonn Hj toisc go n-ath-eagraítear an phróifíl i dtreo na héiginnteachta laghdaithe faisnéise meitibileach. Réamhaisnéisíonn teoiric an MT go mbeidh athruithe neamhthreoracha sa mheitibilóm mar thoradh ar ionsaí luibhiteoirí, rud a mhéadaíonn Hj mar tháscaire ar éiginnteacht mhéadaithe faisnéise meitibileach agus a fhágann dáileadh randamach Si. Mholamar samhail mheasctha freisin, an MT is fearr, ina méadófar go háirithe roinnt meitibilítí a bhfuil luachanna cosanta níos airde acu (luach ard Si), agus go mbeidh freagairtí randamacha ag cinn eile (luach Si níos ísle).
Ag baint úsáide as tuairiscí teoiric faisnéise, déanaimid léirmhíniú ar theoiric an OD chun a thuar go mbeidh (i) méadú ar shainiúlacht meitibileach (innéacs Si) mar thoradh ar athruithe meitibileach speisialta a spreagann luibhiteoirí i stát bunreachtúil neamhspreagtha, rud a thiomáineann sainiúlacht meitibileach (innéacs δj) Méadú ar ghrúpaí meitibileach speisialta áirithe a bhfuil luach cosanta níos airde acu, agus (ii) laghdú ar éagsúlacht meitibileach (innéacs Hj) mar gheall ar an athrú ar dháileadh minicíochta meitibileach go dáileadh coirp níos mó leptin. Ag leibhéal meitibileach aonair, táthar ag súil le dáileadh Si ordaithe, áit a méadóidh an meitibileach luach Si de réir a luach cosanta (Fíor 1B). Ar an mbealach seo, mínímid teoiric an MT chun a thuar go mbeidh (i) athruithe neamhthreoracha i meitibilítí mar thoradh ar spreagadh a eascraíonn i laghdú ar an innéacs δj, agus (ii) méadú ar an innéacs Hj mar gheall ar mhéadú ar neamhchinnteacht meitibileach. Nó randamacht, ar féidir a chainníochtú le heantróp Shannon i bhfoirm éagsúlachta ginearálaithe. Maidir leis an gcomhdhéanamh meitibileach, déanfaidh teoiric an MT dáileadh randamach Si a thuar. Agus aird á tabhairt ar an bhfíric go bhfuil meitibilítí áirithe faoi dhálaí sonracha faoi dhálaí sonracha, agus nach bhfuil dálaí eile faoi dhálaí sonracha, agus go mbraitheann a luach cosanta ar an gcomhshaol, mholamar samhail chosanta measctha freisin, ina bhfuil δj agus Hj dáilte ina dhá leath feadh Méadú Si i ngach treo, ní mhéadóidh ach grúpaí meitibilítí áirithe, a bhfuil luachanna cosanta níos airde acu, Si go háirithe, agus beidh dáileadh randamach ag cinn eile (Fíor 1B).
Chun tuar na teoirice cosanta athshainithe a thástáil ar ais thuairisc na teoirice faisnéise, thógamar larbhaí luibhiteoirí saineolacha (Ms) nó ginearálaithe (Sl) ar dhuilleoga Nepenthes pallens (Fíor 2A). Ag baint úsáide as anailís MS/MS, aisghabhamar 599 speictream MS/MS neamh-iomarcach (comhad sonraí S1) ó shleachta meatánóil fíocháin duille a bailíodh tar éis beathú na mbolb. Agus innéacsanna RDPI, Hj, agus δj á n-úsáid chun athchumrú ábhar faisnéise i gcomhaid chumraíochta MS/MS a shamhlú, nochtar patrúin spéisiúla (Fíor 2B). Is é an treocht fhoriomlán ná, mar a thuairiscítear leis an tuairisc faisnéise, de réir mar a leanann na boilb ag ithe duilleoga, go méadaíonn méid an atheagraithe meitibileach go léir le himeacht ama: 72 uair an chloig tar éis don luibhiteoir ithe, méadaíonn an RDPI go suntasach. I gcomparáid leis an rialú neamhdamáiste, laghdaíodh Hj go suntasach, rud a bhí mar gheall ar an méadú ar chéim speisialtóireachta an phróifíl meitibileach, a cainníochtú ag an innéacs δj. Tá an treocht dealraitheach seo comhsheasmhach le réamh-mheastacháin theoiric an OD, ach níl sé comhsheasmhach le príomh-réamh-mheastacháin theoiric an MT, a chreideann go n-úsáidtear athruithe randamacha (neamhthreoracha) i leibhéil meitibilít mar chamúfláil chosanta (Fíor 1B). Cé go bhfuil ábhar an spreagthóra secretion béil (OS) agus iompar beathaithe an dá luibhiteoir seo difriúil, mar thoradh ar a mbeathú díreach, bhí athruithe comhchosúla i dtreonna Hj agus δj le linn na dtréimhsí fómhair 24 uair an chloig agus 72 uair an chloig. Níor tharla an t-aon difríocht ag 72 uair an chloig de RDPI. I gcomparáid leis an méid de bharr beathú Ms, bhí an meitibileacht fhoriomlán a spreag beathú Sl níos airde.
(A) Dearadh turgnamhach: beathaítear luibhiteoirí muice coitianta (S1) nó saineolaithe (Ms) le duilleoga díshalannaithe plandaí crúiscín, agus i gcás luibhitheoireachta insamhalta, úsáidtear OS Ms (W + OSMs) chun déileáil le pollta créachta suíomhanna duille caighdeánaithe. Larbhaí S1 (W + OSSl) nó uisce (W + W). Is duilleog neamhdamáiste í an rialú (C). (B) Innéacs ionduchtaithe (RDPI i gcomparáid leis an gcairt rialaithe), éagsúlachta (innéacs Hj) agus speisialtóireachta (innéacs δj) ríofa don léarscáil meitibilít speisialta (599 MS/MS; comhad sonraí S1). Léiríonn réaltaí difríochtaí suntasacha idir an beathú díreach luibhiteora agus an grúpa rialaithe (t-thástáil an mhic léinn le t-thástáil péireáilte, *P<0.05 agus ***P<0.001). ns, gan tábhacht. (C) Innéacs réitigh ama an phríomhspeictrim (bosca gorm, aimínaigéad, aigéad orgánach agus siúcra; comhad sonraí S2) agus speictream meitibilítí speisialta (bosca dearg 443 MS/MS; comhad sonraí S1) tar éis cóireála luibhiteora insamhlaithe. Tagraíonn an banda datha don eatramh muiníne 95%. Léiríonn an réalta an difríocht shuntasach idir an chóireáil agus an rialú [anailís chearnach ar athraitheacht (ANOVA), agus ina dhiaidh sin difríocht shuntasach ionraic Tukey (HSD) le haghaidh comparáidí iolracha iar-hoc, *P<0.05, **P<0.01 Agus *** P <0.001]. (D) Speisialtóireacht scaipphlotaí agus próifílí meitibilítí speisialta (samplaí athchleachtacha le cóireálacha éagsúla).
Chun a fháil amach an léirítear an t-athmhúnlú a spreagann luibhiteoirí ag leibhéal an mheitibileoim sna hathruithe i leibhéal na meitibilítí aonair, dhírigh muid ar dtús ar na meitibilítí a ndearnadh staidéar orthu roimhe seo i nduilleoga Nepenthes pallens a bhfuil friotaíocht luibhiteoirí cruthaithe acu. Is comhchuingigh hiodrocsacinnamaimíde-polaimíne iad aimídí feanólacha a charnaíonn le linn phróiseas luibhiteoirí feithidí agus is eol go laghdaíonn siad feidhmíocht feithidí (32). Rinneamar cuardach ar réamhtheachtaithe an MS/MS comhfhreagrach agus phlota muid a gcuar cinéiteach carnach (Fíor S1). Ní ​​haon ionadh é go ndéantar díorthaigh feanóil nach bhfuil baint dhíreach acu leis an gcosaint i gcoinne luibhiteoirí, amhail aigéad clóirígineach (CGA) agus rutin, a laghdú tar éis luibhiteoirí. I gcodarsnacht leis sin, is féidir le luibhiteoirí aimídí feanóil a dhéanamh an-chumhachtach. Mar thoradh ar bheathú leanúnach an dá luibhiteoir bhí beagnach an speictream spreagtha céanna de fheanóilimídí ann, agus bhí an patrún seo soiléir go háirithe le haghaidh sintéis de novo feanóilimídí. Breathnófar an feiniméan céanna agus an bealach 17-hiodrocsaigearanil nonanediol diterpene glycosides (17-HGL-DTGs) á iniúchadh, a tháirgeann líon mór diterpenes neamhchicleacha le feidhmeanna frith-luibhiteora éifeachtacha (33), agus spreag Ms Beathú le Sl próifíl léirithe den chineál céanna (Fíor S1)).
Is é an míbhuntáiste féideartha a bhaineann le turgnaimh bheathaithe dírí luibhiteoirí an difríocht i ráta tomhaltais duilleoga agus am beathaithe luibhiteoirí, rud a fhágann go bhfuil sé deacair na héifeachtaí luibhiteoirí-shonracha de bharr créachta agus luibhiteoirí a dhíchur. Chun sainiúlacht speiceas luibhiteoirí an fhreagairt meitibileach duilleoga spreagtha a réiteach níos fearr, rinneamar insamhladh ar bheathú larbhaí Ms agus Sl tríd an OS úr-bhailithe (OSM agus OSS1) a chur i bhfeidhm láithreach ar an bpuncture caighdeánach W de shuíomhanna duilleoga comhsheasmhacha. Tugtar cóireáil W + OS ar an nós imeachta seo, agus caighdeánaíonn sé an t-ionduchtú trí thús na freagartha a spreagann an luibhiteoir a uainiú go beacht gan éifeachtaí mearbhall a chur faoi deara de bharr difríochtaí i ráta nó i gcainníocht an chaillteanais fíocháin (Fíor 2A) (34). Ag baint úsáide as an bpíblíne anailíse agus ríofa MS/MS, aisghabhamar 443 speictream MS/MS (comhad sonraí S1), a bhí forluiteach leis na speictrim a cuireadh le chéile roimhe seo ó thurgnaimh bheathaithe dírí. Léirigh anailís teoiric faisnéise an tacair sonraí MS/MS seo gur léirigh athchlárú meitibileam speisialaithe duilleoga trí luibhiteoirí a insamhladh spreagthaí OS-shonracha (Fíor 2C). Go háirithe, i gcomparáid le cóireáil OSS1, ba chúis le OSM feabhas ar speisialtóireacht meitibileach ag 4 huaire an chloig. Is fiú a thabhairt faoi deara, i gcomparáid leis an tacar sonraí turgnamhach beathaithe díreach luibhiteoirí, go raibh cinéitic meitibileach léirithe i spás dháthoiseach ag baint úsáide as Hj agus δj mar chomhordanáidí agus treoshuíomh speisialtóireachta an mheitibileam mar fhreagairt ar chóireáil luibhiteora insamhalta le himeacht ama ag méadú go comhsheasmhach (Fíor 2D). Ag an am céanna, rinneamar cainníochtú ar ábhar aimínaigéid, aigéid orgánacha agus siúcraí (comhad sonraí S2) chun imscrúdú a dhéanamh an bhfuil an méadú spriocdhírithe seo ar shaineolas meitibileach mar gheall ar athchumrú meitibileacht lárnach carbóin mar fhreagairt ar luibhiteoirí insamhalta (Fíor S2). Chun an patrún seo a mhíniú níos fearr, rinneamar monatóireacht bhreise ar chinéitic carnadh meitibileach na gconairí feinilaimíde agus 17-HGL-DTG a pléadh roimhe seo. Déantar ionduchtú OS-shonrach luibhiteoirí a chlaochlú ina phatrún athchóirithe difreálach laistigh de mheitibileacht feinilaimíde (Fíor S3). Spreagtar aimídí feinólacha ina bhfuil codanna cúmarín agus caifeoile go roghnach ag OSS1, agus spreagann OSManna ionduchtú sonrach comhchuingigh ferulyl. Maidir leis an gcosán 17-HGL-DTG, braitheadh ​​ionduchtú OS difreálach trí tháirgí malonylation agus dimalonylation iartheachtach (Fíor S3).
Ansin, rinneamar staidéar ar an plaisteacht transcriptóim spreagtha ag OS ag baint úsáide as an tacar sonraí micrea-array cúrsa ama, a insamhlaíonn úsáid OSManna chun duilleoga an phlanda rosette a chóireáil i luibhiteoirí. Forluíonn cinéitic an tsamplála go bunúsach leis an gcineitic a úsáideadh sa staidéar meitibileoime seo (35). I gcomparáid leis an athchumrú meitibileoime ina méadaítear plaisteacht meitibileach go háirithe le himeacht ama, breathnaímid pléascanna transcript neamhbhuana i nduilleoga spreagtha ag Ms, áit a bhfuil ionduchtacht transcriptóim (RDPI) agus speisialtóireacht (δj) ag 1. Bhí méadú suntasach ar uaireanta an chloig, agus éagsúlacht (Hj) ag an bpointe ama seo, laghdaíodh léiriú BMP1 go suntasach, agus ina dhiaidh sin scíth a ligean ar speisialtóireacht transcriptóim (Fíor S4). Glacann teaghlaigh géine meitibileach (mar shampla P450, glúcósailtrasfairéas, agus BAHD-aiciltrasfairéas) páirt sa phróiseas chun meitibilítí speisialta a chur le chéile ó aonaid struchtúracha a dhíorthaítear ó phríomhmheitibileacht, ag leanúint an mhúnla ard-speisialtóireachta luath thuasluaite. Mar staidéar cás, rinneadh anailís ar an gcosán feiniolalainín. Dheimhnigh an anailís go bhfuil na géinte lárnacha i meitibileacht feinilaimíde spreagtha go mór ag OS i luibhiteoirí i gcomparáid le plandaí neamhtharraingthe, agus go bhfuil siad ailínithe go dlúth ina bpatrúin léirithe. Léirigh an fachtóir trascríobh MYB8 agus na géinte struchtúracha PAL1, PAL2, C4H agus 4CL suas an sruth ón gcosán seo tús luath le trascríobh. Taispeánann aiciltrasfairéasaí a bhfuil ról acu i dtionól deiridh feinilaimíde, amhail AT1, DH29, agus CV86, patrún suasrialála fada (Fíor S4). Léiríonn na breathnóireachtaí thuas gur modh cúpláilte é tús luath speisialtóireachta trascríbhinní agus feabhsú níos déanaí ar speisialtóireacht meitibileachta, a d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar an gcóras rialála sioncrónach a chuireann freagairt chosanta chumhachtach tús leis.
Feidhmíonn an t-athchumrú i gcomharthaíocht hormóin plandaí mar shraith rialála a chomhtháthaíonn faisnéis luibhiteoirí chun fiseolaíocht plandaí a athchlárú. Tar éis an insamhalta luibhiteoirí, thomhaiseamar dinimic charnach na bpríomhchatagóirí hormóin plandaí agus léiríomar an comhléiriú ama eatarthu [comhéifeacht comhghaoil ​​Pearson (PCC) > 0.4] (Fíor 3A). Mar a bhíothas ag súil leis, tá hormóin plandaí a bhaineann le bithshintéis nasctha laistigh den líonra comhléirithe hormóin plandaí. Ina theannta sin, mapáiltear sainiúlacht meitibileach (innéacs Si) chuig an líonra seo chun na hormóin plandaí a spreagtar le cóireálacha éagsúla a aibhsiú. Tarraingítear dhá phríomhréimse freagartha sonracha luibhiteoirí: tá ceann amháin sa bhraisle JA, áit a léiríonn JA (a fhoirm bhitheolaíoch ghníomhach JA-Ile) agus díorthaigh JA eile an scór Si is airde; is é an ceann eile eitiléin (ET). Níor léirigh Gibberellin ach méadú measartha ar shainiúlacht luibhiteoirí, agus bhí sainiúlacht ionduchtaithe íseal ag hormóin plandaí eile, amhail cítocínín, áicsin, agus aigéad abscisic, do luibhiteoirí. I gcomparáid le W + W a úsáid ina aonar, is féidir aimpliú bhuaicluach dhíorthaigh JA tríd an bhfeidhmchlár OS (W + OS) a chlaochlú go bunúsach ina tháscaire láidir sonrach de JAanna. Gan choinne, is eol go mbíonn carnadh comhchosúil de JA agus JA-Ile mar thoradh ar OSM agus OSS1 a bhfuil ábhar spreagthóra difriúil acu. I gcodarsnacht le OSS1, spreagtar OSM go sonrach agus go láidir, ach ní aimplíonn OSS1 freagairt créachta bonn (Fíor 3B).
(A) Anailís líonra comhléirithe bunaithe ar ríomh PCC ar insamhalta cinéitice carnadh hormóin plandaí spreagtha ag luibhiteoirí. Léiríonn an nód hormón plandaí aonair, agus léiríonn méid an nóid innéacs Si atá sainiúil don hormón plandaí idir cóireálacha. (B) Carnadh JA, JA-Ile agus ET i nduilleoga de bharr cóireálacha éagsúla léirithe ag dathanna éagsúla: aibreog, W + OSM; gorm, W + OSSl; dubh, W + W; liath, C (rialú). Léiríonn réaltaí difríochtaí suntasacha idir cóireáil agus rialú (ANOVA dhá bhealach agus comparáid il post hoc Tukey HSD ina dhiaidh sin, *** P <0.001). Anailís teoirice faisnéise ar (C)697 MS/MS (comhad sonraí S1) i mbiosintéis JA agus speictream braite lagaithe (irAOC agus irCOI1) agus (D)585 MS/MS (comhad sonraí S1) in ETR1 le comhartha ET lagaithe. Spreag dhá chóireáil luibhiteoirí insamhalta línte plandaí agus plandaí rialaithe feithicle folamh (EV). Léiríonn réaltaí difríochtaí suntasacha idir cóireáil W+OS agus rialú neamh-damáiste (ANOVA dhá bhealach agus comparáid ilchineálach iar-hoc Tukey HSD ina dhiaidh sin, *P<0.05, **P<0.01 agus ***P<0.001). (E) Graif scaipthe den fhreasúra scaipthe in aghaidh speisialtóireachta. Léiríonn na dathanna cineálacha géinmhodhnaithe éagsúla; léiríonn na siombailí modhanna cóireála éagsúla: triantán, W + OSS1; dronuilleog, W + OSM; ciorcal C
Ansin, úsáidimid stráins ghéinmhodhnaithe de Nepenthes maolaithe (irCOI1 agus sETR1) i bpríomhchéimeanna bithshintéise JA agus ET (irAOC agus irACO) agus braistint (irCOI1 agus sETR1) chun meitibileacht an dá hormóin plandaí seo ar luibhiteoirí a anailísiú. Rannchuidiú coibhneasta athchlárúcháin. Ag teacht le turgnaimh roimhe seo, dheimhnigh muid ionduchtú luibhiteora-OS i bplandaí iompróra folamh (EV) (Fíor 3, C go D) agus an laghdú foriomlán san innéacs Hj de bharr OSM, agus méadú ar an innéacs δj. Tá an freagairt níos suntasaí ná an freagairt a spreag OSS1. Taispeánann graf dhá líne ag baint úsáide as Hj agus δj mar chomhordanáidí an dírialáil shonrach (Fíor 3E). Is é an treocht is soiléire ná i stráinsí nach bhfuil comhartha JA acu, go ndéantar na hathruithe ar éagsúlacht meitibileachta agus speisialtóireacht de bharr luibhiteoirí a dhíchur beagnach go hiomlán (Fíor 3C). I gcodarsnacht leis sin, cé go bhfuil an éifeacht fhoriomlán ar athruithe i meitibileacht luibhiteoirí i bhfad níos ísle ná an éifeacht atá ag comharthaíocht JA, laghdaíonn sé an difríocht in innéacsanna Hj agus δj idir spreagthuithe OSM agus OSS1 (Fíor 3D agus Fíor S5). Léiríonn sé seo, sa bhreis ar phríomhfheidhm thrasduchtú comhartha JA, go bhfeidhmíonn trasduchtú comhartha ET mar mhionchoigeartú ar fhreagairt meitibileach speiceas-shonrach luibhiteoirí freisin. Ag teacht leis an bhfeidhm mhionchoigeartaithe seo, ní raibh aon athrú ar ionduchtacht fhoriomlán meitibileachta i bplandaí sETR1. Ar an láimh eile, i gcomparáid le plandaí sETR1, spreag plandaí irACO aimplitiúidí foriomlána comhchosúla d'athruithe meitibileach de bharr luibhiteoirí, ach léirigh siad scóir Hj agus δj atá difriúil go suntasach idir dúshláin OSM agus OSS1 (Fíor S5).
Chun meitibilítí speisialaithe a bhfuil ranníocaíochtaí tábhachtacha acu maidir le freagairt speiceas-shonrach luibhiteoirí a aithint agus a dtáirgeadh a mhionchoigeartú trí chomharthaí ET, bhain muid úsáid as an modh struchtúrach MS/MS a forbraíodh roimhe seo. Braitheann an modh seo ar an modh dé-chnuasaithe chun an teaghlach meitibileach a ath-infheistiú ó bhlúiríní MS/MS [táirge ponc normalaithe (NDP)] agus scór cosúlachta bunaithe ar chaillteanas neodrach (NL). Tháirg an tacar sonraí MS/MS a tógadh trí anailís a dhéanamh ar línte trasghéineacha ET 585 MS/MS (comhad sonraí S1), a réitíodh trína gcnuasú i seacht bpríomhmhodúl MS/MS (M) (Fíor 4A). Tá cuid de na modúil seo pacáilte go dlúth le meitibilítí speisialta a tréithríodh roimhe seo: mar shampla, tá M1, M2, M3, M4 agus M7 saibhir i ndíorthaigh feinil éagsúla (M1), gliocóisídí flavonoid (M2), siúcraí aicile (M3 Agus M4), agus 17-HGL-DTG (M7). Ina theannta sin, ríomhtar an fhaisnéis meitibileach shonrach (innéacs Si) meitibilít aonair i ngach modúl, agus is féidir a dháileadh Si a fheiceáil go hintuigthe. Go hachomair, is sainairíonna speictrim MS/MS a léiríonn sainiúlacht ard luibhiteoireachta agus géinitíopa le luachanna Si arda, agus léiríonn staitisticí kurtosis dáileadh fionnaidh ar chúinne deas an eireabaill. Braitheadh ​​​​dáileadh collóideach caol amháin den sórt sin i M1, inar léirigh aimíd feinil an codán Si is airde (Fíor 4B). Léirigh an 17-HGL-DTG ionduchtaithe luibhiteoireachta a luadh cheana i M7 scór Si measartha, rud a léiríonn céim mheasartha rialála difreálaigh idir an dá chineál OS. I gcodarsnacht leis sin, tá an chuid is mó de na meitibilítí speisialaithe a tháirgtear go bunreachtúil, amhail rutin, CGA, agus siúcraí aicile, i measc na scór Si is ísle. Chun iniúchadh níos fearr a dhéanamh ar chastacht struchtúrach agus ar dháileadh Si idir meitibilítí speisialta, tógadh líonra móilíneach do gach modúl (Fíor 4B). Réamhaisnéis thábhachtach de chuid theoiric an OD (achoimrithe i bhFíor 1B) is ea gur cheart go mbeadh athruithe aontreo i meitibilítí a bhfuil luach cosanta ard acu mar thoradh ar athchóiriú meitibilítí speisialta tar éis luibhithe, go háirithe trína sainiúlacht a mhéadú (seachas dáileadh randamach) Mód) Meitibilít chosanta a thuar teoiric an MT. Tá baint fheidhmiúil ag formhór na ndíorthaigh feinil atá carntha i M1 le meath feidhmíochta feithidí (32). Agus luachanna Si sna meitibilítí M1 á gcomparáid idir na duilleoga spreagtha agus duilleoga comhpháirteacha na bplandaí rialaithe EV ag 24 uair an chloig, thugamar faoi deara go bhfuil treocht mhéadaitheach shuntasach ag sainiúlacht meitibilítí go leor tar éis feithidí luibhithe (Fíor 4C). Níor braitheadh ​​an méadú sonrach ar luach Si ach i bhfeanólaimídí cosanta, ach níor braitheadh ​​aon mhéadú ar luach Si i bhfeinóil eile agus i meitibilítí anaithnide a bhí ann chomhthráthach sa mhodúl seo. Is samhail speisialaithe í seo, atá gaolmhar leis an teoiric OD. Tá na príomh-réamhaisnéisí maidir le hathruithe meitibileach de bharr luibhiteoirí comhsheasmhach. Chun tástáil a dhéanamh ar spreagadh an tsonraíocht seo den speictream feinilaimíde ag ET atá sainiúil do OS, phlotaíomar innéacs Si an mheitibíteil agus chuireamar luach léirithe difreálach ar fáil idir OSM agus OSS1 sna géinitíopaí EV agus sETR1 (Fíor 4D). I sETR1, laghdaíodh an difríocht idir OSM agus OSS1 a spreag feinilaimíd go mór. Cuireadh an modh dé-chnuasaithe i bhfeidhm freisin ar shonraí MS/MS a bailíodh i sraitheanna nach raibh dóthain JA acu chun na príomhmhodúil MS/MS a bhaineann le speisialtóireacht meitibileach rialaithe JA a thuiscint (Fíor S6).
(A) Mar thoradh ar thorthaí braislithe 585 MS/MS bunaithe ar bhlúir chomhroinnte (cosúlacht NDP) agus caillteanas neodrach comhroinnte (cosúlacht NL), tá an modúl (M) comhsheasmhach leis an teaghlach comhdhúile aitheanta, nó trí chomhdhéanamh Meitibilít anaithnid nó droch-mheitibilithe. In aice le gach modúl, taispeántar dáileadh sonrach an mheitibilít (MS/MS) (Si). (B) Líonra móilíneach modúlach: Léiríonn nóid MS/MS agus imill, scóir MS/MS NDP (dearg) agus NL (gorm) (gearr-theorainn, > 0.6). Tá an t-innéacs sainiúlachta meitibilít grádaithe (Si) daite bunaithe ar an modúl (ar chlé) agus mapáilte chuig an líonra móilíneach (ar dheis). (C) Modúl M1 de phlanda EV i riocht bunreachtúil (rialaithe) agus spreagtha (luibhiteoir insamhalta) ag 24 uair an chloig: léaráid líonra móilíneach (is é luach Si méid an nóid, tá feinilaimíd chosanta aibhsithe i ngorm). (D) Léaráid líonra mhóilíneach M1 den líne speictrim sETR1 le dearcadh lagaithe ar EV agus ET: an comhdhúil feinólach a léirítear leis an nód ciorcail ghlasa, agus an difríocht shuntasach (luach P) idir cóireálacha W + OSM agus W + OSS1 mar mhéid an Nóid. CP, N-caifeoil-tíoróisín; CS, N-caifeoil-speirmidín; FP, eistear aigéad N-fhearach-aigéad úrach; FS, N-feirileach-speirmidín; CoP, N', N“-cúmaróilil-tíoróisín; DCS, N', N”-dícaifeoil-speirmidín; CFS, N', N”-caifeoil, feirileach-speirmidín; Lycium barbarum i mac tíre Mac; Nick. O-AS, siúcra O-aicile.
Leathnaíomar an anailís tuilleadh ó ghéinitíopa Nepenthes maolaithe aonair go daonraí nádúrtha, áit a ndearnadh cur síos roimhe seo ar athruithe láidre intraspeiciúla i leibhéil JA luibhiteoirí agus leibhéil meitibilít shonracha i ndaonraí nádúrtha (26). Bain úsáid as an tacar sonraí seo chun 43 geirmphlasma a chlúdach. Tá 123 speiceas plandaí ó N. pallens sna geirmphlasmaí seo. Tógadh na plandaí seo ó shíolta a bailíodh i ngnáthóga dúchasacha éagsúla in Utah, Nevada, Arizona, agus California (Fíor S7), ríomhamar éagsúlacht meitibileachta (ar a dtugtar leibhéal daonra anseo) éagsúlacht β) agus an speisialtóireacht de bharr OSM. Ag teacht le staidéir roimhe seo, bhreathnaíomar raon leathan athruithe meitibileach feadh aiseanna Hj agus δj, rud a léiríonn go bhfuil difríochtaí suntasacha ag geirmphlasmaí i plaisteacht a bhfreagairtí meitibileach ar luibhiteoirí (Fíor S7). Cuireann an eagrú seo breathnuithe roimhe seo i gcuimhne dúinn faoin raon dinimiciúil d'athruithe JA de bharr luibhiteoirí, agus tá luach an-ard coinnithe aige i ndaonra aonair (26, 36). Trí úsáid a bhaint as JA agus JA-Ile chun an comhghaol foriomlán idir Hj agus δj a thástáil, fuarthas amach go bhfuil comhghaol dearfach suntasach idir JA agus innéacs éagsúlachta agus speisialtóireachta an mheitibileoim β (Fíor S7). Tugann sé seo le fios gur féidir go bhfuil an éagsúlacht a spreagtar ag luibhiteoirí in ionduchtú JAanna a braitheadh ​​ag leibhéal an daonra mar gheall ar pholaimorfachtaí meitibileach tábhachtacha de bharr roghnú ó luibhiteoirí feithidí.
Léirigh staidéir roimhe seo go bhfuil difríocht mhór idir cineálacha tobac i gcineál agus i spleáchas coibhneasta ar chosaintí meitibileacha spreagtha agus bunreachtúla. Creidtear go rialaítear na hathruithe seo i dtrasduchtú comharthaí frith-luibhiteoirí agus cumais chosanta ag brú daonra feithidí, timthriall saoil plandaí, agus costais táirgthe cosanta sa nideoige ina bhfásann speiceas áirithe. Rinneamar staidéar ar chomhsheasmhacht athmhúnlú meitibileoim duilleog a spreagann luibhiteoirí sé speiceas Nicotiana dúchasacha do Mheiriceá Thuaidh agus Meiriceá Theas. Tá dlúthghaol ag na speicis seo le Nepenthes Meiriceá Thuaidh, eadhon Nicolas Bociflo. La, N. nicotinis, féar maolaithe Nicotiana n., Nicotiana tabacum, tobac líneach, tobac (Nicotiana spegazzinii) agus tobac duille tobac (Nicotiana obtusifolia) (Fíor 5A) (37). Is plandaí bliantúla den chlad petunia iad sé cinn de na speicis seo, lena n-áirítear an speiceas dea-thréithrithe N. please, agus is plandaí ilbhliantúla den chlad deirfiúr Trigonophyllae iad obtusifolia N. (38). Ina dhiaidh sin, rinneadh ionduchtú W + W, W + OSM agus W + OSS1 ar na seacht speiceas seo chun athchóiriú meitibileach beathaithe feithidí ag leibhéal an speicis a imscrúdú.
(A) Crann fileaginéiteach tosaithe bunaithe ar an dóchúlacht uasta [le haghaidh sintéis glútamín núicléach (38)] agus dáileadh geografach seacht speiceas Nicotiana dlúthghaolmhara (dathanna difriúla) (37). (B) Plota scaipthe d'éagsúlacht speisialaithe do phróifílí meitibileach seacht speiceas Nicotiana (939 MS/MS; comhad sonraí S1). Ag leibhéal an speicis, tá éagsúlacht meitibileachta comhghaolmhar go diúltach leis an méid speisialtóireachta. Taispeántar anailís an chomhghaolmhaireachta ar leibhéal an speicis idir éagsúlacht meitibileach agus speisialtóireacht agus carnadh JA i bhFíor 2. S9. Dath, cineálacha difriúla; triantán, W + OSS1; dronuilleog, W + OSM; (C) Tá dinimic Nicotiana JA agus JA-Ile rangaithe de réir aimplitiúid spreagtha OS (ANOVA dhá bhealach agus Tukey HSD iar-ilchomparáide, * P <0.05, ** P <0.01 agus * ** Chun comparáid a dhéanamh idir W + OS agus W + W, P <0.001). Plota bosca de (D) éagsúlacht agus (E) speisialtóireacht gach speicis tar éis insamhalta a dhéanamh ar JA luibhiteach agus meitile (MeJA). Léiríonn an réalta an difríocht shuntasach idir W + OS agus W + W nó lanolin móide W (Lan + W) nó Lan móide MeJA (Lan + MeJa) agus rialú Lan (anailís athraitheas dhá bhealach, agus ina dhiaidh sin comparáid ilchodach iar-hoc HSD Tukey, *P<0.05, **P<0.01 agus ***P<0.001).
Ag baint úsáide as an modh dé-chnuasaigh, shainaithin muid 9 modúl de 939 MS/MS (comhad sonraí S1). Athraíonn comhdhéanamh MS/MS athchumraithe ag cóireálacha éagsúla go mór i measc modúl éagsúil idir speicis (Fíor S8). Léiríonn léirshamhlú Hj (dá ngairtear anseo éagsúlacht γ ar leibhéal speicis) agus δj go gcomhiomlánaíonn speicis éagsúla i ngrúpaí an-difriúla sa spás meitibileach, áit a mbíonn deighilt ar leibhéal speicis níos suntasaí ná spreagadh de ghnáth. Ach amháin i gcás N. linear agus N. obliquus, taispeánann siad raon dinimiciúil leathan d'éifeachtaí ionduchtaithe (Fíor 5B). I gcodarsnacht leis sin, bíonn freagairt meitibileach níos lú soiléir ag speicis ar chóireáil, ach tá an meitibilóm níos éagsúla. Mar thoradh ar dháileadh speicis-shonrach an fhreagairt meitibileach spreagtha, bhí comhghaol diúltach suntasach idir speisialtóireacht agus éagsúlacht gáma (PCC = -0.46, P = 4.9 × 10-8). Tá athruithe i leibhéil JAs de bharr OS comhghaolmhar go dearfach le speisialtóireacht meitibileach, agus comhghaolmhar go diúltach leis an éagsúlacht gáma meitibileach a léiríonn gach speiceas (Fíor 5B agus Fíor S9). Is fiú a thabhairt faoi deara gur spreag na speicis dá ngairtear speicis "freagartha comhartha" go comhráiteach i bhFíor 5C, amhail néimeatóidí Nepenthes, Nepenthes nepenthes, Nepenthes géar, agus Nepenthes maolaithe, comharthaí suntasacha ag 30 nóiméad. Ní thaispeánann na ráigeanna JA agus JA-Ile le déanaí a bhaineann go sonrach le OS, ach ní thaispeánann baictéir eile ar a dtugtar "neamhfhreagrach comhartha", amhail muilte Nepenthes, Nepenthes púdrach agus N. obtusifolia, ach ionduchtú JA-Ile Edge gan aon sainiúlacht OS (Fíor 5C). Ag an leibhéal meitibileach, mar a luadh thuas, i gcás Nepenthes maolaithe, léirigh na substaintí atá freagrúil don chomhartha sainiúlacht OS agus mhéadaigh siad δj go suntasach, agus laghdaigh siad Hj ag an am céanna. Níor braitheadh ​​an éifeacht tosaithe seo atá sainiúil do OS i speicis atá aicmithe mar speicis neamh-imoibríocha comharthaíochta (Fíor 5, D agus E). Roinntear meitibilítí atá sainiúil do OS níos minice idir speicis atá freagrach ó thaobh comharthaíochta de, agus cruinníonn na braislí comharthaíochta seo le speicis a bhfuil freagairtí comharthaíochta níos laige acu, agus taispeánann speicis a bhfuil freagairtí comharthaíochta níos laige acu níos lú idirspleáchais (Fíor S8). Léiríonn an toradh seo go bhfuil ionduchtú OS-shonrach JAs agus athchumrú OS-shonrach an mheitibileóim iartheachtaigh cúpláilte ag leibhéal an speicis.
Ansin, d'úsáideamar taos lanoline ina raibh meitile JA (MeJA) chun plandaí a chóireáil chun imscrúdú a dhéanamh an bhfuil na modhanna cúplála seo srianta ag infhaighteacht JA a chuireann JA eisgéineach i bhfeidhm, a bheidh i gcíteaplasma na bplandaí. Is é JA dí-eistearú tapa. Fuaireamar an treocht chéanna maidir leis an athrú de réir a chéile ó speicis atá freagrach do chomharthaí go speicis nach bhfuil freagrach do chomharthaí de bharr soláthar leanúnach JA (Fíor 5, D agus E). Go hachomair, rinne cóireáil MeJA athchlárú láidir ar mheitibilóim na néimeatóidí líneacha, N. obliquus, N. aquaticus, N. pallens, agus N. mikimotoi, rud a d'eascair méadú suntasach ar δj agus laghdú ar Hj. Níor léirigh N. purpurea ach méadú ar δj, ach ní Hj. Ní fhreagraíonn N. obtusifolia, a léiríodh roimhe seo go bhfuil leibhéil thar a bheith íseal de JAanna ann, go dona do chóireáil MeJA i dtéarmaí athchumraíocht meitibilóim. Léiríonn na torthaí seo go bhfuil srian fiseolaíoch ar tháirgeadh JA nó ar tharchur comhartha i speicis nach bhfuil freagrach do chomharthaí. Chun an hipitéis seo a thástáil, rinneamar staidéar ar na ceithre speiceas (N. pallens, N. mills, N. pink agus N. microphylla) arna spreagadh ag W + W, W + OSManna agus W + OSS1 Transcriptome (39). Ag teacht le patrún athmhúnlaithe meitibileachta, tá na speicis scartha go maith sa spás transcriptome, agus i measc na speiceas sin, léirigh N. attenuated an RDPI OS-spreagtha is airde, agus bhí an ceann is ísle ag N. gracilis (Fíor 6A). Mar sin féin, fuarthas amach gurbh í an éagsúlacht transcriptome arna spreagadh ag N. oblonga an ceann is ísle i measc na gceithre speiceas, contrártha leis an éagsúlacht meitibileachtach is airde de N. oblonga a léiríodh roimhe seo i seacht speiceas. Léirigh staidéir roimhe seo go míníonn sraith géinte a bhaineann le comharthaí cosanta luatha, lena n-áirítear comharthaí JA, sainiúlacht na bhfreagairtí cosanta luatha arna spreagadh ag spreagthóirí luibhiteoirí i speicis Nicotiana (39). Léirigh comparáid idir na conairí comharthaíochta JA idir na ceithre speiceas seo patrún suimiúil (Fíor 6B). Léirigh formhór na ngéinte sa chonair seo, amhail AOC, OPR3, ACX agus COI1, leibhéil réasúnta ard ionduchtaithe sna ceithre speiceas seo. Mar sin féin, déanann géin ríthábhachtach, JAR4, JA a thiontú ina fhoirm bhitheolaíoch ghníomhach de thrascríbhinní carntha JA-Ile, agus tá a leibhéal trascríobh an-íseal, go háirithe i N. mills, Nepenthes pieris agus N. microphylla. Ina theannta sin, níor braitheadh ​​ach trascríobh géine eile AOS i N. bifidum. D’fhéadfadh na hathruithe seo i léiriú géine a bheith freagrach as na feinitíopaí foircneacha a spreagann an táirgeadh íseal JA i speicis ainéirgeacha comhartha agus ionduchtú N. gracilis.
(A) Anailís teoiric faisnéise ar athchlárú freagairtí luatha trascríobh ceithre speiceas tobac dlúthghaolmhara a sampláladh 30 nóiméad tar éis ionduchtú luibhiteora. Ríomhtar RDPI trí na duilleoga a spreag OS an luibhiteora a chur i gcomparáid leis an rialú créachta. Léiríonn na dathanna speicis éagsúla, agus léiríonn na siombailí modhanna cóireála éagsúla. (B) Anailís ar léiriú géine i gcosáin chomharthaíochta JA i measc ceithre speiceas. Taispeántar an cosán JA simplithe in aice leis an bplota bosca. Léiríonn dathanna éagsúla modhanna próiseála éagsúla. Léiríonn an réalta go bhfuil difríocht shuntasach idir an chóireáil W + OS agus an rialú W + W (don tástáil t an Mhic Léinn le haghaidh difríochtaí péire, *P<0.05, **P<0.01 agus ***P<0.001). OPDA, aigéad 12-ocsafítéidé-éineach; OPC-8: aigéad 0,3-ocsa-2(2′(Z)-peinteinil)-ciclipeantán-1-octánach.
Sa chuid dheireanach, rinneamar staidéar ar an gcaoi a bhféadfadh athmhúnlú speiceas feithidí-shonrach ar mheitibileóm speiceas plandaí éagsúla a bheith frithsheasmhach in aghaidh luibhiteoirí. Leag taighde roimhe seo béim ar an ngéineas Nicotiana. Tá difríocht mhór idir a bhfriotaíocht in aghaidh Ms agus larbhaí (40). Anseo, rinneamar staidéar ar an nasc idir an tsamhail seo agus a plaisteacht meitibileach. Ag baint úsáide as na ceithre speiceas tobac thuas, agus ag tástáil an chomhghaol idir éagsúlacht agus speisialtóireacht an mheitibileóm de bharr luibhiteoirí agus friotaíocht plandaí in aghaidh Ms agus Sl, fuarthas amach go bhfuil comhghaol dearfach idir an fhriotaíocht, an éagsúlacht agus an speisialtóireacht don Sl ginearálaithe, agus go bhfuil an comhghaol idir friotaíocht in aghaidh laonna saineolaithe agus speisialtóireacht lag, agus nach bhfuil an comhghaol le héagsúlacht suntasach (Fíor S10). Maidir le friotaíocht S1, bhí freagairtí an-difriúla ag an N. chinensis agus N. gracilis maolaithe araon, a léiríodh roimhe seo go raibh leibhéil trasduchtaithe comhartha JA agus plaisteacht meitibileach acu, ar ionduchtú luibhiteoirí, agus léirigh siad friotaíocht ard den chineál céanna freisin. Gnéas.
Le seasca bliain anuas, tá creat teoiriciúil curtha ar fáil ag teoiric chosanta plandaí, agus tá líon suntasach éabhlóide agus feidhmeanna meitibilítí speisialaithe plandaí tuartha air bunaithe air. Ní leanann formhór na dteoiricí seo an nós imeachta gnáth maidir le hinfeireachtaí láidre (41). Molann siad réamh-mheastacháin thábhachtacha (3) ag an leibhéal céanna anailíse. Nuair a cheadaíonn tástáil na réamh-mheastacháin thábhachtacha teoiricí sonracha a anailísiú, cuirfidh sé seo ar chumas teoiricí sonracha a bheith á n-anailísiú, ach diúltóidh cinn eile (42). Ina áit sin, déanann an teoiric nua réamh-mheastacháin ag leibhéil éagsúla anailíse agus cuireann sí sraith nua de bhreithnithe tuairisciúla leis (42). Mar sin féin, is féidir an dá theoiric atá molta ag an leibhéal feidhmiúil, MT agus OD, a mhíniú go héasca mar réamh-mheastacháin thábhachtacha ar athruithe meitibileacha speisialaithe de bharr luibhiteoirí: Creideann teoiric OD go bhfuil athruithe i "spás" meitibileach speisialaithe an-threorach. Creideann teoiric MT go mbeidh na hathruithe seo neamhthreorach agus suite go randamach sa spás meitibileach, agus go mbíonn claonadh acu meitibilítí ardluacha cosanta a bheith acu. Rinneadh tástáil ar scrúduithe roimhe seo ar réamh-mheastacháin OD agus MT ag baint úsáide as sraith chúng de chomhdhúile "cosanta" a priori. Cuireann na tástálacha meitibilít-lárnaithe seo bac ar an gcumas méid agus treo athchumrú meitibileachta le linn luibhitheoireachta a anailísiú, agus ní cheadaíonn siad tástáil laistigh de chreat staitistiúil comhsheasmhach chun réamh-mheastacháin thábhachtacha a éileamh ar féidir iad a mheas mar iomláine Athruithe i meitibileachta plandaí a chainníochtú. Anseo, bhain muid úsáid as an teicneolaíocht nuálach i meitibileachta bunaithe ar MS ríomhaireachtúil agus rinneamar anailís MS díchonbhlúite i dtuairiscí teoiric reatha ginearálta na faisnéise chun an t-idirdhealú idir an dá cheann atá molta ag leibhéal meitibileachta domhanda a thástáil. Príomhréamh-mheas na teoirice seo. Cuireadh teoiric na faisnéise i bhfeidhm i go leor réimsí, go háirithe i gcomhthéacs taighde bithéagsúlachta agus sreabhadh cothaitheach (43). Mar sin féin, chomh fada agus is eol dúinn, is é seo an chéad fheidhmchlár a úsáideadh chun spás faisnéise meitibileach plandaí a chur síos agus fadhbanna éiceolaíocha a bhaineann le hathruithe meitibileach sealadacha mar fhreagairt ar leideanna comhshaoil ​​a réiteach. Go háirithe, tá cumas an mhodha seo ina chumas patrúin laistigh de speicis plandaí agus eatarthu a chur i gcomparáid chun scrúdú a dhéanamh ar an gcaoi a bhfuil luibhiteoirí tar éis teacht chun cinn ó speicis éagsúla go patrúin mhaicreabhlóideacha idir speicis ag leibhéil éagsúla éabhlóide. Meitibileacht.
Déanann anailís chomhpháirteanna príomhúla (PCA) tacar sonraí ilathrógach a thiontú ina spás laghdaithe toisí ionas gur féidir príomhthreocht na sonraí a mhíniú, mar sin is gnách go n-úsáidtear é mar theicníc taiscéalaíoch chun an tacar sonraí a pharsáil, amhail meitibileach díchonbhlóide. Mar sin féin, caillfidh laghdú toisí cuid den ábhar faisnéise sa tacar sonraí, agus ní féidir le PCA faisnéis chainníochtúil a sholáthar faoi shaintréithe atá ábhartha go háirithe don teoiric éiceolaíoch, amhail: conas a athchumraíonn luibhiteoirí éagsúlacht i réimsí speisialaithe (mar shampla, saibhreas, dáileadh) agus flúirse) meitibilítí? Cé na meitibilítí is réamhinsintí iad ar staid spreagtha luibhiteora ar leith? Ó pheirspictíocht na sainiúlachta, na héagsúlachta agus na hin-ionsúite, déantar ábhar faisnéise phróifíl meitibilít an duilleoige-shonraigh a dhíghrádú, agus fuarthas amach gur féidir le hithe luibhiteoirí meitibileacht shonrach a ghníomhachtú. Gan choinne, thugamar faoi deara, mar a thuairiscítear sna táscairí teoiric faisnéise a cuireadh i bhfeidhm, go bhfuil forluí mór sa staid meitibileach a eascraíonn as seo tar éis ionsaithe an dá luibhiteoir (an ginearálaí Sl a bheathaítear san oíche) agus an saineolaí Solanaceae Ms. Cé go bhfuil difríocht shuntasach idir a n-iompar beathaithe agus a dtiúchan. Tionscnóir comhchuingeach aigéad sailleach-aimínaigéad (FAC) in OS (31). Trí OS luibhiteora a úsáid chun créachta pollta caighdeánaithe a chóireáil, léirigh cóireáil luibhiteora insamhalta treocht chomhchosúil freisin. Cuireann an nós imeachta caighdeánaithe seo chun freagairt plandaí d'ionsaithe luibhiteora a insamhladh deireadh leis na tosca mearbhaill de bharr athruithe in iompar itheacháin luibhiteora, rud a fhágann céimeanna éagsúla damáiste ag amanna éagsúla (34). Laghdaíonn FAC, ar a dtugtar príomhchúis OSM, JAS agus freagairtí hormóin plandaí eile in OSS1, agus laghdaíonn OSS1 na céadta uair (31). Mar sin féin, ba chúis le OSS1 leibhéil chomhchosúla de charnadh JA i gcomparáid le OSM. Léiríodh roimhe seo go bhfuil an freagairt JA i Nepenthes maolaithe an-íogair do OSM, áit a bhféadann FAC a ghníomhaíocht a choinneáil fiú má chaolaítear é 1:1000 le huisce (44). Dá bhrí sin, i gcomparáid le OSM, cé go bhfuil an FAC in OSS1 an-íseal, is leor é chun ráig JA leordhóthanach a spreagadh. Léirigh staidéir roimhe seo gur féidir próitéiní cosúil le porin (45) agus oligosaccharides (46) a úsáid mar leideanna móilíneacha chun freagairtí cosanta plandaí a spreagadh in OSS1. Mar sin féin, níl sé soiléir fós an bhfuil na spreagthóirí seo in OSS1 freagrach as carnadh JA a breathnaíodh sa staidéar reatha.
Cé nach bhfuil mórán staidéar ann a chuireann síos ar na méarloirg meitibileacha difreálacha de bharr cur i bhfeidhm luibhiteoirí éagsúla nó aigéad salaicileach eisigineach (47), níor chuir aon duine isteach ar an suaitheadh ​​speiceas-shonrach luibhiteoirí i líonra féar plandaí agus a éifeachtaí ar an bhfaisnéis phearsanta shonrach. Déantar staidéar córasach ar thionchar foriomlán na meitibileachta. Dheimhnigh an anailís seo freisin go mbíonn tionchar ag an nasc inmheánach líonra hormóin le hormóin plandaí eile seachas aigéid JA ar shainiúlacht an atheagrúcháin meitibileach de bharr luibhiteoirí. Go háirithe, bhraith muid go raibh ET de bharr OSM i bhfad níos mó ná an ceann de bharr OSS1. Tá an modh seo comhsheasmhach le níos mó ábhar FAC in OSM, ar coinníoll riachtanach agus leordhóthanach é chun pléascadh ET a spreagadh (48). I gcomhthéacs an idirghníomhaíochta idir plandaí agus luibhiteoirí, tá feidhm chomharthaíochta ET ar dhinimic meitibilítí plandaí-shonracha fós sporadach agus ní dhíríonn sé ach ar ghrúpa comhdhúile amháin. Ina theannta sin, bhain formhór na staidéar úsáid as cur i bhfeidhm eisgéineach ET nó a réamhtheachtaithe nó coscairí éagsúla chun rialáil ET a staidéar, agus ina measc sin beidh go leor fo-iarsmaí neamhshonracha mar thoradh ar na cur i bhfeidhm ceimiceach eisgéineach seo. Chomh fada agus is eol dúinn, is ionann an staidéar seo agus an chéad scrúdú córasach ar scála mór ar ról ET in úsáid ET chun plandaí trasghéineacha lagaithe a tháirgeadh agus a bhrath chun dinimic meitibileachta plandaí a chomhordú. Is féidir le hionduchtú ET luibhiteora-shonrach freagairt na meitibileachta a mhodhnú sa deireadh. Is é an ceann is suntasaí ná ionramháil thrasghéineach géinte bithshintéise ET (ACO) agus bhraistint (ETR1) a nocht carnadh de novo feinilaimídí luibhiteora-shonracha. Taispeánadh roimhe seo gur féidir le ET carnadh nicitín spreagtha ag JA a mhionchoigeartú trí putrescine N-methyltransferase a rialáil (49). Mar sin féin, ó thaobh na meicnice de, níl sé soiléir conas a mhionchoigeartaíonn ET ionduchtú feinimíde. Chomh maith le feidhm trasduchtú comhartha ET, is féidir an sreabhadh meitibileach a shúntáil chuig S-adenosyl-1-meitiainín freisin chun an infheistíocht in aimídí polai-aimínifeanól a rialáil. Is ET agus idirmheánach coitianta de chonair bhithshintéiseach polaimine é S-adenosyl-1-meitiainín. Ní mór staidéar breise a dhéanamh ar an meicníocht trína rialaíonn comhartha ET leibhéal feinilaimíde.
Ar feadh i bhfad, mar gheall ar an líon mór meitibilítí speisialta de struchtúr anaithnid, níorbh fhéidir leis an aird dhian ar chatagóirí meitibileach sonracha na hathruithe ama ar éagsúlacht meitibileach tar éis idirghníomhaíochtaí bitheolaíocha a mheas go docht. Faoi láthair, bunaithe ar anailís teoiric faisnéise, is é an príomhthoradh a bhaineann le fáil speictrim MS/MS bunaithe ar mheitibilítí neamhchlaonta ná go leanann luibhiteoirí a itheann nó a insamhlaíonn luibhiteoirí de bheith ag laghdú éagsúlacht meitibileach iomlán meitibileach an duilleoige agus ag an am céanna ag méadú a chéime speisialtóireachta. Tá an méadú sealadach seo ar shonrúlacht meitibileach de bharr luibhiteoirí bainteach le méadú sineirgisteach ar shonrúlacht trascríbhinní. Is é an ghné is mó a chuireann leis an speisialtóireacht meitibileach níos mó seo (a bhfuil luach Si níos airde aige) ná an meitibileach speisialta leis an bhfeidhm luibhiteach a tréithríodh roimhe seo. Tá an tsamhail seo comhsheasmhach le tuar theoiric OD, ach níl an tuar ar MT a bhaineann le randamacht athchlárú meitibileach comhsheasmhach. Mar sin féin, tá na sonraí seo comhsheasmhach freisin le tuar an mhúnla mheasctha (an MT is fearr; Fíor 1B), toisc go bhféadfadh meitibilítí neamhthréithrithe eile le feidhmeanna cosanta anaithnide dáileadh Si randamach a leanúint fós.
Patrún suntasach a gabhadh tuilleadh leis an taighde seo ná go bhfuil leibhéil éagsúla eagraíochta éabhlóidí ar an "chosaint is fearr" ón leibhéal micrea-éabhlóide (planda aonair agus daonra tobac) go scála éabhlóideach níos mó (speicis tobac dlúthghaolmhara). Tá difríochtaí suntasacha i gcumas luibhiteoirí. Mhol Moore et al. (20) agus Kessler agus Kalske (1) go neamhspleách na trí leibhéal feidhmiúla bithéagsúlachta a idirdhealaigh Whittaker (50) ar dtús a thiontú ina n-athruithe ama bunreachtúla agus spreagtha ar éagsúlacht cheimiceach; níor achoimrigh na húdair seo. Ní leagann na nósanna imeachta maidir le bailiú sonraí meitibileachta ar scála mór amach conas éagsúlacht meitibileach a ríomh ó na sonraí seo. Sa staidéar seo, breithneoidh coigeartuithe beaga ar aicmiú feidhmiúil Whittaker éagsúlacht α-meitibileach mar éagsúlacht speictrim MS/MS i bplanda ar leith, agus éagsúlacht β-meitibileach mar an meitibileacht bhunúsach intraspeictreach de ghrúpa daonraí Spáis, agus beidh éagsúlacht γ-meitibileach ina síneadh ar anailís speiceas comhchosúil.
Tá an comhartha JA riachtanach do raon leathan freagairtí meitibileach luibhiteoirí. Mar sin féin, tá easpa tástála cainníochtúla dian ann maidir le rannchuidiú rialála intrashonraí bithshintéise JA le héagsúlacht meitibileach, agus tá sé fós deacair a thuiscint an suíomh ginearálta é comhartha JA le haghaidh éagsúlú meitibileach spreagtha ag strus ar scála macra-éabhlóideach níos airde. Thugamar faoi deara go spreagann nádúr luibhiteach Nepenthes luibhiteach speisialtóireacht meitibileach agus go bhfuil éagsúlacht speisialtóireachta meitibileach laistigh de dhaonra speiceas Nicotiana agus i measc speiceas Nicotiana gaolmhara comhghaolmhar go dearfach go córasach le comharthaíocht JA. Ina theannta sin, nuair a lagaítear an comhartha JA, cuirfear an sainiúlacht meitibileach a spreagann luibhiteoir géinitíopa aonair ar ceal (Fíor 3, C agus E). Ós rud é go bhfuil athruithe speictrim meitibileach na ndaonraí Nepenthes maolaithe go nádúrtha den chuid is mó cainníochtúil, is féidir go bhfuil na hathruithe san éagsúlacht β meitibileach agus sa sainiúlacht san anailís seo mar thoradh den chuid is mó ar an spreagadh láidir i gcatagóirí comhdhúile saibhir i meitibileach. Tá na haicmí comhdhúile seo i réim i bpróifíl an mheitibileach agus bíonn comhghaol dearfach acu le comharthaí JA.
Ós rud é go bhfuil meicníochtaí bithcheimiceacha an speicis tobac atá gaolmhar leis an-difriúil, sainaithnítear na meitibilítí go sonrach sa ghné cháilíochtúil, mar sin tá sé níos anailísí. Nochtann próiseáil na teoirice faisnéise ar an bpróifíl meitibileach gafa go gcuireann ionduchtú luibhiteoirí leis an gcomhbhabhtáil idir éagsúlacht gáma meitibileach agus speisialtóireacht. Tá ról lárnach ag an gcomhartha JA sa chomhbhabhtáil seo. Tá an méadú ar speisialtóireacht meitibileach comhsheasmhach leis an bpríomh-réamhaisnéis OD agus tá comhghaol dearfach aige le comhartha JA, agus tá comhartha JA comhghaolmhar go diúltach le héagsúlacht gáma meitibileach. Léiríonn na samhlacha seo gurb é plaisteacht JA a chinneann cumas OD plandaí den chuid is mó, bíodh sé ar scála micrea-éabhlóideach nó ar scála éabhlóideach níos mó. Nochtann turgnaimh iarratais eisigineacha JA a sheachnaíonn lochtanna bithshintéise JA freisin gur féidir speicis tobac atá gaolmhar go dlúth a idirdhealú i speicis atá freagrach do chomharthaí agus neamhfhreagrach do chomharthaí, díreach cosúil lena modh JA agus plaisteacht meitibileach a spreagann luibhiteoirí. Ní féidir le speicis neamhfhreagracha comharthaí freagairt mar gheall ar a n-ábaltacht JA intíreach a tháirgeadh agus dá bhrí sin tá siad faoi réir teorainneacha fiseolaíocha. D’fhéadfadh sé seo a bheith mar thoradh ar mhútais i roinnt géinte tábhachtacha i gconair chomharthaíochta JA (AOS agus JAR4 i N. crescens). Léiríonn an toradh seo gur dócha gur athruithe i mbraithint agus i bhfreagrúlacht inmheánach hormóin is mó a thiomáineann na patrúin mhaicreabhsúlóideacha idirspeicis seo.
Chomh maith leis an idirghníomhaíocht idir plandaí agus luibhiteoirí, tá baint ag iniúchadh na héagsúlachta meitibileach le gach dul chun cinn teoiriciúil tábhachtach i dtaighde an oiriúnaithe bhitheolaíoch don chomhshaol agus éabhlóid tréithe feinitíopacha casta. Leis an méadú ar mhéid na sonraí a fhaightear le hionstraimí nua-aimseartha MS, is féidir le tástáil hipitéisí ar éagsúlacht meitibileach anois dul thar difríochtaí meitibilít aonair/catagóire agus anailís dhomhanda a dhéanamh chun patrúin gan choinne a nochtadh. I bpróiseas na hanailíse ar scála mór, is meafar tábhachtach an smaoineamh léarscáileanna bríocha a cheapadh ar féidir iad a úsáid chun sonraí a iniúchadh. Dá bhrí sin, is toradh tábhachtach ar an meascán reatha de mheitibileamaíocht MS/MS neamhchlaonta agus teoiric faisnéise go soláthraíonn sé méadracht shimplí ar féidir í a úsáid chun léarscáileanna a thógáil chun brabhsáil tríd an éagsúlacht meitibileach ar scálaí tacsanomaíocha éagsúla. Is é bunriachtanas an mhodha seo é. Staidéar ar mhicrea-/macra-éabhlóid agus éiceolaíocht phobail.
Ag an leibhéal macra-éabhlóideach, is é croílár theoiric chomhéabhlóideach plandaí-feithidí Ehrlich agus Raven (51) ná a thuar gurb é an éagsúlacht san éagsúlacht meitibileach idir speicis is cúis le héagsúlú na sliocht plandaí. Mar sin féin, sna caoga bliain ó foilsíodh an saothar ceannródaíoch seo, is annamh a tástáladh an hipitéis seo (52). Tá sé seo den chuid is mó mar gheall ar shaintréithe fíligéineacha tréithe meitibileach inchomparáide trasna sliocht plandaí fad-achair. Is féidir an tearcacht a úsáid chun modhanna anailíse sprice a ancaire. Déanann an sreabhadh oibre MS/MS reatha a phróiseáiltear le teoiric faisnéise cainníochtú ar chosúlacht struchtúrach MS/MS meitibilítí anaithnide (gan roghnú meitibilítí roimh ré) agus déanann sé na MS/MSanna seo a thiontú ina sraith de MS/MS, agus mar sin i meitibileacht ghairmiúil déantar comparáid idir na samhlacha macra-éabhlóideacha seo i scála aicmithe. Táscairí staitistiúla simplí. Tá an próiseas cosúil le hanailís fíligéineach, ar féidir léi ailíniú seicheamhach a úsáid chun ráta an éagsúlú nó éabhlóid carachtar a chainníochtú gan réamhthuar roimh ré.
Ag an leibhéal bithcheimiceach, léiríonn hipitéis scagthástála Firn agus Jones (53) go gcoimeádtar éagsúlacht meitibileach ag leibhéil éagsúla chun amhábhair a sholáthar chun gníomhaíochtaí bitheolaíocha meitibilítí neamhghaolmhara nó ionadaithe roimhe seo a fheidhmiú. Soláthraíonn modhanna teoiric faisnéise creat ina bhféadfar na haistrithe éabhlóideacha meitibilít-shonracha seo a tharlaíonn le linn speisialtóireachta meitibilítí a chainníochtú mar chuid den phróiseas scagthástála éabhlóideach atá beartaithe: oiriúnú bitheolaíoch gníomhach ó shainiúlacht íseal go sainiúlacht ard Meitibilítí coiscthe timpeallachta ar leith.
Tríd is tríd, i laethanta tosaigh na bitheolaíochta móilíní, forbraíodh teoiricí tábhachtacha cosanta plandaí, agus meastar go forleathan gurb iad modhanna bunaithe ar hipitéisí an t-aon bhealach chun dul chun cinn eolaíoch a dhéanamh. Tá sé seo den chuid is mó mar gheall ar na teorainneacha teicniúla a bhaineann le meitibileacht iomlán a thomhas. Cé go bhfuil modhanna bunaithe ar hipitéisí an-úsáideach chun meicníochtaí cúiseacha eile a roghnú, tá a gcumas ár dtuiscint ar líonraí bithcheimiceacha a fheabhsú níos teoranta ná na modhanna ríomhaireachtúla atá ar fáil faoi láthair in eolaíocht chomhaimseartha atá dian ar shonraí. Dá bhrí sin, tá teoiricí nach féidir a thuar i bhfad níos faide ná raon feidhme na sonraí atá ar fáil, mar sin ní féidir deireadh a chur leis an bhfoirmle hipitéiseach/timthriall tástála dul chun cinn sa réimse taighde (4). Réamh-mheasaimid gur féidir leis an sreabhadh oibre ríomhaireachtúil meitibileacht a tugadh isteach anseo spéis a athbheochan sna saincheisteanna le déanaí (conas) agus deiridh (cén fáth) maidir le héagsúlacht meitibileach, agus cur le ré nua d'eolaíocht sonraí atá treoraithe go teoiriciúil. Rinne an ré athscrúdú ar na teoiricí tábhachtacha a spreag glúnta roimhe seo.
Déantar beathú díreach luibhiteoirí trí larbha dara haois nó larbha Sl a thógáil ar dhuilleog amháin de phlanda crúsca bán-daite de phlanda amháin atá ag bláthú rós, le 10 macasamhail plandaí in aghaidh an phlanda. Cuireadh teanntáin ar na larbhaí feithidí, agus bailíodh an fíochán duilleoige a bhí fágtha 24 agus 72 uair an chloig tar éis an ionfhabhtaithe agus reoiteadh go tapa é, agus baineadh na meitibilítí amach.
Insamhladh a dhéanamh ar chóireáil luibhiteach ar bhealach an-shioncrónaithe. Is é an modh ná rothaí patrún fabraice a úsáid chun trí shraith dealga a tholladh ar gach taobh de lár-easnacha na dtrí dhuilleog lánfhairsingithe den phlanda le linn chéim fáis an gharland fabraice, agus Ms caolaithe 1:5 a chur i bhfeidhm láithreach. Nó bain úsáid as méara lámhainnithe chun S1 OS a chur isteach sa chréacht thollaidh. Bain agus próiseáil duilleog mar a thuairiscítear thuas. Bain úsáid as an modh a thuairiscítear roimhe seo chun meitibilítí príomhúla agus hormóin plandaí a bhaint amach (54).
I gcás feidhmeanna eisgéineacha JA, déantar trí dhuilleog peitile gach ceann de na sé phlanda rós-bhlátha de gach speiceas a chóireáil le 20μl de ghreamú lanoline ina bhfuil 150μg MeJA (Lan + MeJA), agus 20μl de lanolin móide cóireáil créachta (Lan + W), nó bain úsáid as 20μl de lanolin íon mar rialú. Bailíodh na duilleoga 72 uair an chloig tar éis na cóireála, reoiteadh iad go tapa i nítrigin leachtach, agus stóráladh iad ag -80°C go dtí go n-úsáidfear iad.
Aithníodh ceithre líne thrasghéineacha JA agus ET, eadhon irAOC (36), irCOI1 (55), irACO agus sETR1 (48), inár ngrúpa taighde. Léirigh irAOC laghdú láidir ar leibhéil JA agus JA-Ile, agus ní raibh irCOI1 íogair do JAanna. I gcomparáid le EV, mhéadaigh carnadh JA-Ile. Ar an gcaoi chéanna, laghdóidh irACO táirgeadh ET, agus i gcomparáid le EV, méadóidh sETR1, atá neamhíogair do ET, táirgeadh ET.
Úsáidtear speictriméadar léasair fóta-acústach (braiteoir ET fíor-ama Sensor Sense ETD-300) chun tomhas ET a dhéanamh ar bhealach neamh-ionrach. Díreach tar éis na cóireála, gearradh leath de na duilleoga agus aistríodh iad chuig fial gloine séalaithe 4 ml, agus ligeadh don spás ceann carnadh laistigh de 5 uair an chloig. Le linn an tomhais, sruthlaíodh gach fial le sruth de 2 lítear/uair an chloig d'aer íon ar feadh 8 nóiméad, a bhí imithe roimhe sin trí chatalaíoch arna sholáthar ag Sensor Sense chun CO2 agus uisce a bhaint.
Foilsíodh na sonraí micrea-araí ar dtús i (35) agus sábháladh iad i mBunachar Sonraí Cuimsitheach um Léiriú Géine an Lárionad Náisiúnta um Fhaisnéis Biteicneolaíochta (NCBI) (uimhir iontrála GSE30287). Baineadh na sonraí a fhreagraíonn do na duilleoga de bharr na cóireála W + OSManna agus an rialú neamh-damáiste amach don staidéar seo. Is é log2 an déine amh. Roimh an anailís staitistiúil, rinneadh an bunlíne a thiontú agus a normalú go dtí a 75ú peircintíl ag baint úsáide as an bpacáiste bogearraí R.
Aisghabhadh na sonraí bunaidh maidir le seicheamhú RNA (RNA-seq) de speicis Nicotiana ó Chartlann Léitheoireachta Gearra (SRA) NCBI, is é PRJNA301787 uimhir an tionscadail, a thuairiscigh Zhou et al. (39) agus leanann siad ar aghaidh mar a thuairiscítear i (56). Roghnaíodh na sonraí amha a phróiseáil W + W, W + OSM agus W + OSS1 a fhreagraíonn do speicis Nicotiana le haghaidh anailíse sa staidéar seo, agus próiseáladh iad ar an mbealach seo a leanas: Ar dtús, tiontaíodh na léamha amha RNA-seq go formáid FASTQ. Athraíonn HISAT2 FASTQ go SAM, agus tiontaíonn SAMtools comhaid SAM go comhaid BAM sórtáilte. Úsáidtear StringTie chun léiriú géine a ríomh, agus is é a mhodh léirithe ná go bhfuil blúirí in aghaidh gach míle blúire bonn in aghaidh gach milliún blúire trascríobh seicheamhaithe.
Tá an colún crómatagrafaíochta Acclaim (150 mm x 2.1 mm; méid na gcáithníní 2.2μm) a úsáidtear san anailís agus an colún garda 4 mm x 4 mm déanta as an ábhar céanna. Úsáidtear an grádán dénártha seo a leanas sa chóras Crómatagrafaíochta Leachtacha Ultra-Ardfheidhmíochta (UHPLC) Dionex UltiMate 3000: 0 go 0.5 nóiméad, isocratach 90% A [uisce dí-ianaithe, 0.1% (v/v) aicéatóinítríl agus 0.05% aigéad formach], 10% B (Aicéatóinítríl agus 0.05% aigéad formach); 0.5 go 23.5 nóiméad, is é an chéim ghrádáin 10% A agus 90% B, faoi seach; 23.5 go 25 nóiméad, isocratach 10% A agus 90% B. Is é 400μl/nóim an ráta sreafa. I gcás gach anailíse MS, instealladh an t-eluent colúin isteach in anailíseoir ceathairpholach agus am-eitilte (qTOF) atá feistithe le foinse leictrispraeála atá ag feidhmiú i mód ianúcháin dhearfaigh (voltas ribeach, 4500 V; asraon ribeach 130 V; teocht triomú 200°C; sreabhadh aeir triomú 10 lítear/nóim).
Déan anailís ar blúirí MS/MS (dá ngairtear MS/MS anseo feasta) atá neamhbhainteach nó dothuigthe ó na sonraí chun faisnéis struchtúrach a fháil faoin bpróifíl meitibileach inbhraite fhoriomlán. Braitheann coincheap an mhodha MS/MS neamh-idirdhealaitheach ar an bhfíric go bhfuil fuinneog leithlisithe maise an-mhór ag an gceathairphoil [dá bhrí sin, meas gach comhartha cóimheas mais-go-lucht (m/z) mar bhlúirí]. Ar an gcúis seo, toisc nach raibh an ionstraim Impact II in ann claonadh CE a chruthú, rinneadh roinnt anailísí neamhspleácha ag baint úsáide as luachanna fuinnimh imbhuailte díscaoilte (CE) méadaithe de bharr imbhuailte. Go hachomair, déan anailís ar an sampla ar dtús trí UHPLC-ianú leictreaspraeála/qTOF-MS ag baint úsáide as modh mais-speictriméadrachta aonair (coinníollacha íseal-ilroinnte a ghintear trí ilroinnt in-fhoinse), ag scanadh ó m/z 50 go 1500 ag minicíocht athrá 5 Hz. Bain úsáid as nítrigin mar an gás imbhuailte le haghaidh anailíse MS/MS, agus déan tomhais neamhspleácha ag na ceithre voltas díscaoilte imbhuailte éagsúla seo a leanas: 20, 30, 40, agus 50 eV. Le linn an phróisis tomhais, is ag an gceathairphoil atá an fhuinneog leithlisithe maise is mó, ó m/z 50 go 1500. Nuair a shocraítear an turgnamh m/z agus leithead an leithlisithe tosaigh go 200, gníomhaíonn bogearraí oibriúcháin an ionstraime an raon maise go huathoibríoch agus 0 Da. Déan scanadh le haghaidh blúirí maise mar atá i mód maise aonair. Bain úsáid as formáit sóidiam (50 ml isopropanol, 200 μl aigéad formach agus 1 ml tuaslagán uiscí 1M NaOH) le haghaidh calabrú maise. Ag baint úsáide as algartam calabrúcháin ardchruinnis Bruker, déantar an comhad sonraí a chalabrú tar éis an speictream meánach a rith i dtréimhse ama ar leith. Bain úsáid as feidhm easpórtála bhogearraí Anailís Sonraí v4.0 (Brook Dalton, Bremen, an Ghearmáin) chun na comhaid sonraí amha a thiontú go formáid NetCDF. Tá an tacar sonraí MS/MS sábháilte sa bhunachar sonraí meitibileamaice oscailte MetaboLights (www.ebi.ac.uk) leis an uimhir iontrála. MTBLS1471.
Is féidir tionól MS/MS a bhaint amach trí anailís chomhghaolmhaireachta idir comharthaí cáilíochta MS1 agus MS/MS le haghaidh fuinneamh imbhuailte íseal agus ard agus rialacha nua-churtha i bhfeidhm. Úsáidtear an script R chun an anailís chomhghaolmhaireachta ar dháileadh an réamhtheachtaí don táirge a bhaint amach, agus úsáidtear an script C# (https://github.com/MPI-DL/indiscriminant-MS-MS-assembly-pipeline) chun na rialacha a chur i bhfeidhm.
Chun earráidí dearfacha bréagacha de bharr torainn chúlra agus comhghaol bréagach de bharr gnéithe m/z áirithe a bhrath i roinnt samplaí amháin a laghdú, úsáidimid feidhm “buaic líonta” an phacáiste R XCMS (le haghaidh ceartú torainn chúlra). Ba chóir í seo a úsáid chun déine “NA” (buaic neamhbhraite) a athsholáthar. Nuair a úsáidtear an fheidhm buaice líonta, bíonn go leor luachanna déine “0” sa tacar sonraí a mbeidh tionchar acu ar ríomh an chomhghaolmhaireachta. Ansin, déanaimid comparáid idir na torthaí próiseála sonraí a fhaightear nuair a úsáidtear an fheidhm buaice líonta agus nuair nach n-úsáidtear an fheidhm buaice líonta, agus ríomhaimid luach an torainn chúlra bunaithe ar an meánluach measta ceartaithe, agus ansin cuirimid na luachanna déine 0 seo in ionad an luach cúlra ríofa. Chomh maith leis sin, níor bhreithníomar ach gnéithe a raibh a ndéine níos mó ná trí huaire an luach cúlra agus mheasamar iad mar “bhuaiceanna fíor”. I gcás ríomhanna PCC, ní bhreithnímid ach comharthaí m/z an réamhtheachtaí samplach (MS1) agus na dtacar sonraí blúire le hocht mbuaic fíor ar a laghad.
Más rud é go bhfuil déine na gné cáilíochta réamhtheachtaí sa sampla iomlán comhghaolmhar go suntasach le déine laghdaithe na gné cáilíochta céanna atá faoi réir fuinneamh imbhuailte íseal nó ard, agus mura lipéadaítear an ghné mar bhuaic iseatóp ag CAMERA, is féidir í a shainiú tuilleadh. Ansin, trí na péirí réamhtheachtaí-táirge féideartha go léir a ríomh laistigh de 3 soicind (an fhuinneog ama coinneála measta le haghaidh coinneáil buaice), déantar an anailís chomhghaolmhaireachta. Ní mheastar gur blúire é ach amháin nuair a bhíonn an luach m/z níos ísle ná luach an réamhtheachtaí agus nuair a tharlaíonn ilroinnt MS/MS san áit shamplach chéanna sa tacar sonraí leis an réamhtheachtaí as a dtagann sé.
Bunaithe ar an dá riail shimplí seo, eisiamaimid na blúirí sonraithe a bhfuil luachanna m/z níos mó acu ná m/z an réamhtheachtaí aitheanta, agus bunaithe ar shuíomh an tsampla ina bhfuil an réamhtheachtaí le feiceáil agus an blúire sonraithe. Is féidir freisin na gnéithe cáilíochta a ghintear ag go leor blúirí in-fhoinse a ghintear i mód MS1 a roghnú mar réamhtheachtaithe iarrthóra, rud a ghineann comhdhúile MS/MS iomarcacha. Chun an iomarcaíocht sonraí seo a laghdú, má sháraíonn cosúlacht NDP na speictream 0.6, agus má bhaineann siad leis an gcrómatagram “pcgroup” atá anótáilte ag CAMERA, déanfaimid iad a chumasc. Ar deireadh, cumascaimid na ceithre thoradh CE go léir a bhaineann leis an réamhtheachtaí agus na blúirí isteach sa speictream ilchodach dí-chomhshocraithe deiridh tríd an mbuaic déine is airde a roghnú i measc na mbuaiceanna iarrthóra go léir leis an luach m/z céanna ag fuinnimh imbhuailte éagsúla. Tá na céimeanna próiseála ina dhiaidh sin bunaithe ar choincheap an speictrim ilchodaigh agus cuirtear san áireamh na coinníollacha CE éagsúla is gá chun an dóchúlacht ilroinnte a uasmhéadú, toisc nach féidir roinnt blúirí a bhrath ach amháin faoi fhuinneamh imbhuailte sonrach.
Baineadh úsáid as RDPI (30) chun ionduchtacht an phróifíl meitibileach a ríomh. Díorthaítear éagsúlacht an speictrim meitibileach (innéacs Hj) ó líonmhaireacht réamhtheachtaithe MS/MS ag baint úsáide as eintreapacht Shannon an dáilte minicíochta MS/MS ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas a thuairiscigh Martínez et al. (8). Hj = −∑i = 1mPijlog2(Pij) áit a gcomhfhreagraíonn Pij do mhinicíocht choibhneasta an i-ú MS/MS sa j-ú sampla (j = 1, 2,…, m) (i = 1, 2, …, m) t).
Sainmhínítear sainiúlacht meitibileach (innéacs Si) mar chéannacht léirithe MS/MS ar leith i ndáil leis an minicíocht idir na samplaí atá á mbreithniú. Ríomhtar sainiúlacht MS/MS mar Si = 1t (∑j = 1tPijPilog2PijPi)
Úsáid an fhoirmle seo a leanas chun innéacs δj atá sainiúil don mheitibileam de gach sampla j a thomhas, agus meán na sainiúlachta MS/MS δj = ∑i = 1mPijSi
Ailínítear speictrim MS/MS i mbeirteanna, agus ríomhtar an chosúlacht bunaithe ar an dá scór. Ar dtús, ag baint úsáide as NDP caighdeánach (ar a dtugtar modh comhghaolmhaireachta cosínis freisin), bain úsáid as an gcothromóid seo a leanas chun cosúlacht na coda idir na speictrim a scóráil NDP = (∑iS1 & S2WS1, iWS2, i) 2∑iWS1, i2∑iWS2, i2 áit a bhfuil S1 agus S2 Dá réir sin, i gcás speictream 1 agus speictream 2, chomh maith le WS1, i agus WS2, léiríonn i an meáchan bunaithe ar an déine buaice ina bhfuil an difríocht idir an i-ú buaic choiteann idir an dá speictream níos lú ná 0.01 Da. Ríomhtar an meáchan mar seo a leanas: W = [déine buaice] m [cáilíocht] n, m = 0.5, n = 2, mar a mhol MassBank.
Cuireadh an dara modh scórála i bhfeidhm, a bhain le hanailísiú a dhéanamh ar an NL comhroinnte idir MS/MS. Chun na críche seo, bhain muid úsáid as na 52 liosta NL a bhíonn le fáil go minic le linn an phróisis ilroinnte MS i gcomhar le chéile, agus an NL níos sainiúla (comhad sonraí S1) a ndearnadh nótaí air roimhe seo don speictream MS/MS de na meitibilítí tánaisteacha den speiceas Nepenthes lagaithe (9, 26). Cruthaigh veicteoir dénártha de 1 agus 0 do gach MS/MS, a fhreagraíonn do reatha agus neamhbheith roinnt NL faoi seach. Bunaithe ar an gcosúlacht achair Eoclaideach, ríomhtar an scór cosúlachta NL do gach péire de veicteoirí NL dénártha.
Chun dé-chnuasach a dhéanamh, d'úsáideamar an pacáiste R DiffCoEx, atá bunaithe ar shíneadh ar Anailís Chomhléirithe Géine Ualaithe (WGCNA). Ag baint úsáide as maitrísí scórála NDP agus NL de speictrim MS/MS, d'úsáideamar DiffCoEx chun an maitrís comhghaoil ​​​​chompordach a ríomh. Déantar an dé-chnuasach tríd an bparaiméadar “cutreeDynamic” a shocrú go modh = “hibrid”, cutHeight = 0.9999, deepSplit = T, agus minClusterSize = 10. Íoslódáladh cód foinse R DiffCoEx ó chomhad breise 1 ag Tesson et al. (57); Is féidir an pacáiste bogearraí R WGCNA riachtanach a fháil i https://horvath.genetics.ucla.edu/html/CoexpressionNetwork/Rpackages/WGCNA.
Chun anailís líonra mhóilíneach MS/MS a dhéanamh, ríomhamar nascacht speictreach péireáilte bunaithe ar chineálacha cosúlachta NDP agus NL, agus úsáideadh bogearraí Cytoscape chun toipeolaíocht líonra a léirshamhlú ag baint úsáide as leagan amach orgánach in fheidhmchlár síneadh algartam leagan amach yFiles CyFilescape.
Bain úsáid as leagan 3.0.1 de R chun anailís staitistiúil a dhéanamh ar na sonraí. Rinneadh measúnú ar shuntasacht staitistiúil trí úsáid a bhaint as anailís athraitheas dhá bhealach (ANOVA), agus ina dhiaidh sin tástáil iar-hoc difríochta suntasaí macánta Tukey (HSD). Chun an difríocht idir an chóireáil luibheolaíoch agus an rialú a anailísiú, rinneadh anailís ar an dáileadh dhá-eireaballach den dá ghrúpa samplaí leis an athraitheas céanna trí úsáid a bhaint as tástáil t an Mhic Léinn.
Le haghaidh ábhar breise don alt seo, féach http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/6/24/eaaz0381/DC1
Is alt rochtana oscailte é seo atá dáilte faoi théarmaí an Cheadúnais Creative Commons Attribution-Non-Commercial, a cheadaíonn an úsáid, an dáileadh agus an atáirgeadh in aon mheán, fad is nach chun críche tráchtála atá an úsáid deiridh agus gurb é an bunphrionsabal go bhfuil an saothar bunaidh ceart. Tagairt.
Nóta: Ní iarrann muid ort ach do sheoladh ríomhphoist a sholáthar ionas go mbeidh a fhios ag an duine a mholann tú don leathanach gur mian leat go bhfeicfidís an ríomhphost agus nach turscar é. Ní ghabhfaimid aon seoltaí ríomhphoist.
Úsáidtear an cheist seo chun tástáil a dhéanamh an cuairteoir thú agus chun cosc ​​a chur ar chur isteach turscair uathoibríoch.
Soláthraíonn teoiric na faisnéise airgeadra uilíoch chun meitibilóim speisialta a chur i gcomparáid agus chun teoiricí cosanta tástála a thuar.
Soláthraíonn teoiric na faisnéise airgeadra uilíoch chun meitibilóim speisialta a chur i gcomparáid agus chun teoiricí cosanta tástála a thuar.
©2021 Cumann Meiriceánach um Chur Chun Cinn na hEolaíochta. gach ceart ar cosaint. Tá AAAS ina chomhpháirtí de HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef agus COUNTER. EolaíochtAdvances ISSN 2375-2548.